细胞系开发猪CD4分子（CD4）ELISA试剂盒检测说明

曾经快乐

　细胞系开发需自备的设备及试剂：
　　1.450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）
　　2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.
　　3.Eppendorf移液器.
　　4.蒸馏水或去离子水.
　　5.脱脂棉吸水纸.
　　6.37℃恒温箱.
　　7.100ml和1000ml量筒.
　　8.准备若干个标准品稀释管.
　　试剂盒的储存及有效期：
　　未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。
　　使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。
　　实验原理：
　　将目标抗体包被于微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入微生物化的目标抗体，将未结合的生物素抗体洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。
　　精密度：
　　精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100
　　批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
　　批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
　　批内差:CV<10%Inter-批间差:CV<13%
　　稳定性：
　　经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
　　为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。